Лабораторная работа - Биохимия мочи - файл n1.doc

Лабораторная работа - Биохимия мочи
скачать (1136 kb.)
Доступные файлы (1):
n1.doc1136kb.29.05.2012 23:52скачать

n1.doc

2.1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПЛОТНОСТИ.

Сущность метода.

Плотность - это масса единицы объема:

(г/см3; кг/м3)

где р - плотность жидкости

m - масса жидкости, г или кг

V - объем жидкости, см3 или м 3.

Плотность мочи складывается из плотности ее составных частей и отражает их количественное соотношение. Значение плотности мочи зави­сит от температуры. Так, при повышении температуры объем жидкости благодаря усилению скорости броуновского движения и ослаблению межмолекулярных воздействий, что приводит к уменьшению плотности. При охлаждении наблюдается обратная картина. Поэтому величину плотности всегда приводят к 20°С, внося поправку в результаты определения.

Плотность воды при 4°С и давлении 760 мм рт. столба - 1 г/см3. Для определения плотности существуют различные методы: пикнометрический, метод с применением гидростатических весов и ареометрический - наиболее простым и быстрым.

Ареометрический метод основан на законе Архимеда, согласно ко­торому на тело, погруженное в жидкость, действует выталкивающая сила (Р), направленная вверх и равная весу вытесненной им жидкости:



(Н)

где: V – объем ареометра, м3.

ρ – плотность жидкости, кг/м3

g – ускорение свободного падения, м/с2

Очевидно, что чем ниже плотность жидкости, тем меньше выталки­вающая сила, действующая на ареометр, и тем глубже он погружается в жидкость.

Ареометр состоит из стеклянной полой трубки, в нижней части ко­торой помещены металлические шарики. Верхняя часть трубки сужена и имеет деления. В зависимости от массы металлических шариков ареометры имеют различные диапазоны измерения.

Для определения плотности мочи используют ареометры - урометры с диапазоном измерения от 1,010 до 1,075 г/см3.

Ход работы

В сухой цилиндр вместимостью 100 мл (см3) наливают осторожно по стенке, чтобы не образовывалась пена, около 80-85 см3 мочи. Затем в мочу опускают сухой и чистый урометр, диаметр которого должен быть меньше диаметра цилиндра на 1 см. Легким толчком по верхушке уромет­ра заставляют его совершить несколько колебательных движений вниз и вверх.

После остановки урометра снимают показания плотности с точно­стью до половины деления. Отсчет производят по нижнему краю мениска, который должен находиться на уровне глаза.

Урометр достают из цилиндра, ополаскивают дистиллированной во­дой, вытирают и помещают в специальный пенал.

Измеряют температуру мочи в цилиндре. Если температура мочи не совпадает с указанной на урометре, следует внести поправку: на каждый 1 град. Выше - к показанию урометра прибавляют 0,0003, на каждый 1 град. Ниже - вычитают по 0,0003.

Обработка результатов

Плотность мочи рассчитывают по формуле (2.1.3), если температура мочи была выше 20°С, и по формуле (2.1.4), если температура мочи была ниже 20.

(г/см3)

где р20- плотность мочи при 20 град. С (г/см3);

рt - плотность мочи при заданной температуре (г/см3);

t - температура исследуемой мочи (° С).


2.2. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АММИАКА [7]
Сущность метода

Метод основан на способности аммонийных солей реагировать с формальдегидом с выделением соответствующих кислот. Например:

4NН4С1 +О=СН2 → N4(СН2)б +6 НОН+4НС1

формальдегид гексаметилен

тетрамин

(уротропин)

В результате накопления кислоты реакция среды изменяется от щелочной к кислой, и фенолфталеин обесцвечивается. Образовавшуюся кислоту оттитровывают щелочью, по количеству которой делают пересчет на содержание аммиака.

Если реакция мочи кислая, то необходимо нейтрализовать ки­слоту щелочью, иначе результат будет завышенным.

В моче здоровых животных аммиака содержится от 0,03 до 0,07%.
Ход работы

В колбу вместимостью 100-150 см пипеткой вносят 5 см3 свежей мочи, добавляют 1-2 капли 1%-ного раствора фенолфталеина. Если фенол­фталеин бесцветен (реакция мочи кислая), то титруют раствором 0,1 моль/л щелочи до слабо-розового цвета. Если фенолфталеин окрашивает­ся в малиновый цвет (реакция мочи щелочная), то приступают к определе­нию аммиака без предварительной подготовки образца.

Добавляют в колбу с мочой 2,5 см3 свеженейтрализованного 30%-ного раствора формалина. Раствор обесцвечивается. Далее титруют из бю­ретки 0,Ш раствором NаОН до слабо-розовой окраски, не исчезающей в течение 1 минуты. Объем щелочи, пошедшей на титрование, вводят в рас­четную формулу.
Обработка результатов

Массовую долю аммиака рассчитывают по формуле

(%)

где: X - количество аммиака, %;

V - объем раствора гидроксида натрия пошедшего на титрование, см , 1,7- количество аммиака, соответствующее 1 мл (см3)

0,1 N р-ра гидроксида натрия, мг; § - объем мочи, взятой для анализа, см3; 1000 - коэффициент пересчета массы аммиака в граммы; 100 - коэффициент пересчета в проценты.

Для подсчета количества аммиака (М) в суточном объеме мочи (V) используют формулу:

N = 0,1*V (г/сут),

где V - суточный объем мочи, л.

Примечания

Количество аммиака, выделяющегося в норме за сутки у крупного рогатого скота составляет (0,40 - 0,60) г, у овец - 0,32 г, у лошадей -0,40 г, у человека - (0,6 - 1,3) г.

Избыточное выделение аммиака свидетельствует об ацетонемии, белковой интоксикации, избыточном приеме высококонцентрированных кормов или заболеваний печени, связанных с ослаблением синтеза мочеви­ны и увеличением кислот в тканях.


2.5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ КОМПОНЕНТОВ [4,6,7]

а). Качественная реакция на белок.

Сущность метода

Все реакции, применяемые для исследования мочи на белок, ос­нованы на осаждении и выпадении его в осадок под действием концентрированных кислот. При протеинурии в моче присутствуют альбумины (см. раздел 1). Альбумины относятся к кислым белкам, поэтому их ИЭТ находится при рН = 4,6-4,7. Отсюда следует:



Ход работы

В пробирку наливают 1-2 см3 концентрированной азотной кислоты и осторожно по стенке наслаивают равный объем профильтрованной мочи.

При наличии белка на границе двух жидкостей появляется мутное белое кольцо. Если в моче содержится незначительное количество белка, то кольцо появляется не сразу, а спустя 2-3 минуты. Проба с азотной ки­слотой достаточно чувствительна и позволяет обнаружить до 0,0033% бел­ка.

б). Качественная реакция на сахар

Сущность метода

Определение сахара в моче основано на способности редуци­рующих Сахаров, в частности глюкозы, восстанавливать медь:






Ход работы.

В пробирку наливают 2-3 см3 исследуемой мочи, добавляют около 1 см3 10%-ного раствора гидроксида натрия и осторожно, по каплям, 1%-ный раствор сульфата меди до появления голубого окрашивания.

Затем жидкость в верхней ее части нагревают до начала кипе­ния. Появление желто-красного осадка оксида меди (1) свидетельствует о наличии сахара.

Изменение цвета без осадка может быть при наличии муцина, моче­вой кислоты и др.
в). Качественная реакция на кетоновые тела.

Сущность метода

При различного рода заболеваниях в моче появляются кетоно­вые тела. К ним относятся ацетон, кето-масляная и окси-масляная ки­слоты. Основную массу кетоновых тел составляет ацетон, обнаружить ко­торый можно йодоформной пробой:





Ход работы.

В пробирку наливают 2-3 см3 исследуемой мочи, 5 капель реакти­ва Люголя (содержит свободный йод) и 5 капель 10%-ного раствора гид­роксида натрия. В присутствии ацетона образуется йодоформ в виде жел­товатой мути с характерным специфическим запахом.



Учебный материал
© nashaucheba.ru
При копировании укажите ссылку.
обратиться к администрации